ELISA實(shí)驗(yàn)原理簡單，步驟少，流程短，試劑盒操作相對簡便，實(shí)驗(yàn)小白也能輕松上手。然而，實(shí)驗(yàn)上手雖快，想要得到可靠的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，卻并不那么容易。

為了更好地助力實(shí)驗(yàn)，這里將大家關(guān)心的ELISA試劑盒＆樣本常見問題整理如下：

試劑盒

Q1 你們的ELISA試劑盒能檢測什么物種？

A1

目前我們的試劑盒檢測的種屬主要為人、小鼠、大鼠；小部分指標(biāo)涉及猴、兔、豬、雞等特殊種屬。

如果試劑盒的命名帶有特定指向（如人），代表專門針對此物種；沒有指明物種，則代表該試劑盒在目前公司產(chǎn)品涉及的種屬（例如人、小鼠、大鼠、猴、兔等）內(nèi)通用；其他特殊種屬的檢測適用性，請聯(lián)系技術(shù)支持確認(rèn)。

Q2 96T ELISA試劑盒能檢測多少樣本？是否需要做復(fù)孔？

A2

為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，我們建議標(biāo)準(zhǔn)品和樣品都做復(fù)孔，但并不強(qiáng)行要求ELISA實(shí)驗(yàn)一定要做復(fù)孔/3復(fù)孔，客戶可根據(jù)自己的需求設(shè)定復(fù)孔實(shí)驗(yàn)。詳細(xì)信息見下表：

Q3 需檢測的樣品較多，能否減少標(biāo)曲的孔數(shù)？

A3

為保證結(jié)果的準(zhǔn)確度，不建議減少標(biāo)曲的孔數(shù)，請確保能夠檢測至少6個(gè)不同的標(biāo)準(zhǔn)品濃度（含空白孔)。

Q4 ELISA試劑盒要使用多次，但樣本較多，是否可以只做一次標(biāo)曲？

A4

雖然ELISA實(shí)驗(yàn)的操作步驟相同，但每次實(shí)驗(yàn)的各種影響因素都會(huì)有所變化。所以，每次實(shí)驗(yàn)時(shí)，都必須重新繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，以得到更準(zhǔn)確可靠的檢測結(jié)果。

如果需要做多次實(shí)驗(yàn)，溶解后的最高濃度標(biāo)準(zhǔn)品可以分裝保存于-20℃條件下，避免反復(fù)凍融，半個(gè)月內(nèi)使用有效。

樣本

Q1 血清血漿樣本應(yīng)該選用哪種真空采血管收集？

A1

血清：不含抗凝劑的采血管/含促凝劑采血管

（通常為紅色、黃色、橘色管蓋的采血管）

血漿：含抗凝劑的采血管

（通常為綠色、紫色管蓋的采血管）

樣品收集后，若在1周內(nèi)進(jìn)行檢測，可保存于2-8℃條件下；若不能及時(shí)檢測，請按一次使用量分裝，凍存于-20℃條件下（1個(gè)月內(nèi)檢測）或-80℃條件下（3個(gè)月內(nèi)檢測），避免反復(fù)凍融。

檢測前，應(yīng)緩慢融化冷凍過的樣本，并離心除去凍融過程中產(chǎn)生的沉淀物。

Q2 采集時(shí)，如何盡可能避免溶血現(xiàn)象？

A2

溶血可由多種理化因素和毒素引起。在體外，機(jī)械性強(qiáng)力振蕩、低溫冷凍等誘因均可引起溶血。為避免溶血對檢測結(jié)果產(chǎn)生影響，應(yīng)注意：

（1）靜脈采血時(shí)，回抽壓力不宜過大；

（2）一次性采血量不宜過少；

（3）采集的全血不宜激烈振蕩；

（4）離心轉(zhuǎn)速不宜過大；

（5）收集的全血需盡快處理成血清/血漿，全血不能凍融；

（6）若需要麻醉采血，需使用沒有溶血作用的麻醉劑。

Q3 組織/細(xì)胞樣本收集中提到的“反復(fù)凍融”，過程應(yīng)該如何操作？

A3

組織樣本：組織研磨后，將其-80℃放置1h/液氮放置0.5h，再置于30℃水浴鍋中輕微振蕩，使其迅速融化，反復(fù)操作1-2次即可；

細(xì)胞樣本：按上述操作步驟，反復(fù)凍融2-3次。若為膜蛋白，可以適當(dāng)做超聲處理，但需要控制好超聲的溫度、頻率；

建議在樣本中提前加入蛋白酶抑制劑。常規(guī)情況下推薦使用PMSF。

Q4 怎樣判斷我的樣本是否需要稀釋或做其他處理？

A4

試劑盒的檢測范圍不等同于樣本中待測物的濃度范圍，建議實(shí)驗(yàn)前通過相關(guān)文獻(xiàn)預(yù)估樣本中待測物的濃度，并通過預(yù)實(shí)驗(yàn)確定樣本的實(shí)際濃度情況。

如果是常規(guī)樣本類型，可以咨詢ELISA技術(shù)支持，以獲取樣本的推薦稀釋倍數(shù)，并安排預(yù)實(shí)驗(yàn)檢測；

如果樣品中待測物的濃度過高或過低，請對樣本做適當(dāng)?shù)南♂尰驖饪s；

如果樣本中的分析物濃度遠(yuǎn)低于試劑盒的最低檢測限，建議選擇靈敏度更高的試劑盒來檢測。

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